畜牧兽医学报

作者：马中元, 郑君佐, 梁志博, 潘丽, 曾巧英

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730046

关键词：猪瘟,E2,单B细胞,表位,ELISA

基金：国家生猪技术创新中心战略重点研究项目(NCTIP-XD/C03)

本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法, 用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先，构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC，通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白；其次，用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠，通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后，利用半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链，测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体，再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞, 制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明，本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体，即mAb3A9(IgG1, kappa)和mAb4F7(IgG2a, lambda), 分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL39和259GNTTVKVHASDERGP273。此外，用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法，在血清样本检测过程中，均展现出优异的诊断敏感性(97.49%，95.97%)及特异性(96.08%，94.38%)，该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。

来源：2024年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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