畜牧兽医学报

作者：张慧, 路豆昆, 张怡秋, 赵刚, 陈颖钰, 陈曦, 胡长敏, 郭爱珍

单位：1. 西南民族大学畜牧兽医学院, 成都 610041；2. 华中农业大学动物医学院, 武汉 430070；3. 宁夏大学生命科学学院, 银川 750021

关键词：牛支原体,肺组织精准切片模型,体外感染,炎性反应

基金：西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助(ZYN2023045);西南民族大学引进高层次人才科研资助金资助(RQD2023031);宁夏回族自治区重点研发计划项目(2021BEF02028);宁夏回族自治区重点研发计划项目(2023BCF01038)

本研究旨在建立一种牛支原体体外感染模型-牛肺组织精准切片(precision-cut lung tissue slices, PCLS)感染模型。采集2月龄犊牛新鲜肺脏，经低熔点琼脂糖灌注、固定后，使用振动切片机制成厚度为250 μm的牛PCLS，利用牛支原体野毒株HB0801(P1)及其传代致弱株P150以108 CFU·孔-1的剂量进行体外感染，分别经qRT-PCR、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验、3D荧光显微镜全景扫描、免疫组化等技术评估牛支原体在PCLS中的感染效果。结果显示正常PCLS在体外培养72 h后，细胞活力可维持在60%以上，组织形态学观察PCLS边缘清晰，肺泡结构正常；qRT-PCR检测牛支原体强、弱菌株在PCLS中的基因拷贝数，发现二者均可存活和增殖，免疫组化观察牛支原体主要定位于PCLS的肺泡腔周围以及支气管间隙，LDH试验检测发现牛支原体强、弱菌株感染18 h出现细胞毒性反应，二者均可诱导PCLS产生促炎因子IL-1β和IL-8，且强毒株诱导水平显著高于弱毒株(P < 0.05)。本研究初步建立了牛支原体PCLS体外感染模型，提供了一种可模拟牛支原体体内感染试验的离体模型，为今后研究牛支原体与宿主相互作用提供借鉴和参考。

来源：2024年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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