畜牧兽医学报

作者：吴梦丽, 孙华林, 杨吉飞, 赵亚茹, 关贵全, 殷宏, 牛庆丽

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730000；2. 国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 兰州 730046；3. 扬州大学, 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：非洲猪瘟病毒,BRD4,BD1/2,3D4/21细胞,稳定表达细胞系

基金：国家自然基金面上项目(32072830);国家重点研发计划(2021YFD1800101);甘肃省重大专项计划项目(22ZD6NA001);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(CAAS-ZDRW202409);甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024);特派团项目(22CX8NA011);中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2021-LVRI)

前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4, BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) 的复制，为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响，通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域，利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系，分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先，以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标，构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2，并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装，获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选，成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平，并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明：成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比，BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料，并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。

来源：2024年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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