畜牧兽医学报

作者：占乐杨, 苟婧萱, 张曼琪, 傅唯轩, 兰守信, 涂健, 王振宇, 邵颖, 宋祥军

单位：安徽农业大学 动物科技学院 兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室, 安徽 合肥 230000

关键词：Tae4,Ⅵ型分泌系统,金黄色葡萄球菌,产单核细胞李氏杆菌,抗生素替代

基金：2022年国家级大学生创新创业训练计划项目(S202210364039);2022年国家级大学生创新创业训练计划项目(S202210364026);2023年安徽农业大学省级大学生创新创业训练计划项目(X202310364040)

旨在探究Ⅵ型分泌系统(Type Ⅵ secretion systems，T6SS)的毒力效应蛋白Tae4酰胺酶对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S. aureus)及产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes，L. monocytogenes)的抑菌作用。将pET-28a-Tae4重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(Escherichia coli BL21，E. coli BL21)进行目的蛋白诱导表达，优化IPTG的诱导时间、浓度、温度，最后纯化后的Tae4蛋白通过琼脂孔扩散试验、最小抑菌浓度测定、抗生素联用抑菌试验分别作用于S. aureus和L. monocytogenes。SDS-PAGE电泳结果显示，本试验中重组蛋白诱导表达最佳条件为：IPTG终浓度为0.5 mmol·L-1，16 ℃诱导16 h。重组蛋白大小约为21 ku，可溶性表达于培养上清中。琼脂孔扩散试验结果显示，Tae4蛋白浓度500 μg·mL-1时S. aureus菌株均出现13mm以上抑菌圈，效果与菌株血清型有关，L. monocytogenes菌株均出现18mm以上抑菌圈；最小抑菌浓度试验结果显示，Tae4蛋白对S. aureus的MIC约为250 μg·mL-1，对L. monocytogenes的MIC约为125 μg·mL-1，点板法和微量肉汤稀释法结果一致；抗生素联用抑菌试验结果显示，Tae4蛋白与青霉素(penicillin，PG)联合使用均比单独使用的抑菌效果要好，且对L. monocytogenes的抑菌效果优于S. aureus。综上，Tae4蛋白对金黄色葡萄球菌和产单核细胞李氏杆菌具有抑菌效果，与青霉素联用抑菌效果得到了增强，为后续抗生素替代提供理论依据。

来源：2024年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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