畜牧兽医学报

作者：贾宇航, 郭良富, 张茹楠, 赵阿勇, 刘玉芳, 储明星

单位：1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，畜禽生物育种全国重点实验室，北京 100193；2. 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院，杭州 311300；3. 郓城县畜牧服务中心，郓城 274700

关键词：绵羊,成肌细胞增殖分化,miR-127,转录因子PAX3

基金：国家资助博士后研究人员计划(GZC20233053);财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系(CARS-38);中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ZDRW202106);中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS13)

旨在探究miR-127对绵羊骨骼肌成肌细胞增殖与分化的影响，并通过鉴定miR-127上游核心启动子区域筛选调控其表达的转录因子。本研究以体外分离培养的小尾寒羊胎羊骨骼肌原代成肌细胞为试验材料，过表达或干扰miR-127后，采用RT-qPCR、EdU染色、流式细胞仪分析、免疫荧光染色等方法探究miR-127对绵羊成肌细胞增殖、凋亡和分化的影响。基于生物信息学分析和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-127核心启动子区域及其转录因子。结果表明，在绵羊成肌细胞中过表达miR-127后，促进了细胞增殖相关基因PCNA、CDK4的表达(P < 0.01)；抑制了细胞凋亡相关基因Caspase3、BAX的表达(P < 0.05)；EdU结果显示，绵羊成肌细胞中过表达miR-127后，细胞阳性率显著提升(P < 0.05)；流式细胞仪分析显示，miR-127过表达可显著增加成肌细胞S期和G2期细胞比例并减少成肌细胞的凋亡。在细胞分化试验中，过表达miR-127显著增加了成肌细胞分化相关基因MYOD1和MYHC mRNA的表达水平(P < 0.05)，显著增加了MYHC的阳性肌管面积(P < 0.05)。抑制miR-127表达则出现与上述相反的结果。为进一步揭示调控miR-127表达的调控因子，双荧光素酶活性检测结果显示，miR-127上游1 500~1 800 bp(miR-127-P6)区段活性最高，推断其为miR-127的核心启动子区。生物信息学预测表明，在miR-127核心启动子区存在一个与转录因子PAX3的结合位点。在绵羊成肌细胞中过表达转录因子PAX3后，miR-127启动子活性和miR-127的表达均极显著增加(P < 0.01)。本研究表明，绵羊miR-127显著促进绵羊骨骼肌成肌细胞增殖分化，减少了成肌细胞凋亡，进而参与骨骼肌成肌细胞的发育过程；进一步研究发现，绵羊miR-127上游的1 500~1 800 bp是其核心启动子区，转录因子PAX3正向调节miR-127的转录。本研究为进一步探究绵羊肌肉生长发育性状的分子机制提供了理论参考。

来源：2024年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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