畜牧兽医学报

作者：李相辰, 王林楠, 于正青, 张莉, 杨晨晨, 宋亮丽

单位：宁夏大学动物科技学院，银川 750021

关键词：槲皮素,奶牛乳腺上皮细胞,脂磷壁酸,自噬,紧密连接

基金：宁夏自然科学基金资助项目(2021AAC03040);宁夏重点研发(引才专项)资助(2020BEB04035)

旨在探究槲皮素(quercetin)修复脂磷壁酸(lipoteichoic acid, LTA)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(mammary alveolar cells-large T antigen, MAC-T)紧密连接损伤的作用机制。本试验以MAC-T为研究对象，设置不同浓度的LTA组(0、0.1、1、10 μg·mL-1)、不同浓度的槲皮素组(0、5、10、20 μmol·L-1)、空白组，检测不同浓度LTA和槲皮素对MAC-T细胞活力的影响。设置对照组(不做任何处理)、低、中、高浓度LTA组(0.1、1、10 μg·mL-1)，筛选LTA最佳作用浓度；设置对照组(不做任何处理)、高浓度LTA+低浓度槲皮素(5 μmol·L-1)、高浓度LTA+中浓度槲皮素组(10 μmol·L-1)、高浓度LTA+高浓度槲皮素组(20 μmol·L-1)，筛选槲皮素最佳作用浓度。在自噬与紧密连接关系的研究中，将细胞分为对照组(不做任何处理)、高浓度LTA组、高浓度LTA+中浓度槲皮素组、高浓度LTA+自噬抑制剂氯喹(chloroquine，CQ)组(50 μmol·L-1)。每组均进行3次重复，槲皮素与氯喹均在LTA作用前加入，即使用槲皮素和氯喹分别孵育细胞3 h后，再加入10 μg·mL-1 LTA继续培养12 h，通过CCK-8法检测不同浓度LTA和槲皮素对MAC-T活力的影响，利用Western blot和免疫荧光检测细胞紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1、Claudin-1)和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3、P62)的表达水平。结果显示，中、高浓度LTA对MAC-T活力有显著影响，但细胞活性维持在90%以上，不同浓度槲皮素对MAC-T活力均无显著影响。此外，LTA诱导后的MAC-T中紧密连接蛋白表达降低，自噬水平升高；槲皮素作用MAC-T后，细胞紧密连接蛋白表达升高，自噬水平降低；自噬抑制剂CQ作用后，自噬水平被抑制，紧密连接蛋白表达升高。LTA可导致MAC-T自噬过度激活，破坏紧密连接功能，而槲皮素可通过抑制自噬恢复紧密连接功能。该研究结果为奶牛乳腺炎的治疗提供了新的研究思路和理论依据。

来源：2024年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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