畜牧兽医学报

作者：高力国, 申翰钦, 陈诒全, 陈胜, 蔺文成, 陈峰

单位：1. 华南农业大学动物科学学院，广州 510642；2. 广东精捷检验检测有限公司，云浮 527400

关键词：猪轮状病毒,VP6*蛋白,间接ELISA,原核表达

基金：广东省乡村振兴战略专项资金(“大专项+任务清单”)项目(220628175593089)

旨在建立猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)的抗体检测方法。本研究以PoRV截短的VP6*(aa149-332)蛋白作为检测抗原，建立PoRV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示：截短的重组VP6*(aa149-332)以包涵体和可溶性两种形式存在，大小为22.5 ku。优化后的ELISA反应条件：VP6*(aa149-332)包被量为25 ng·孔-1，抗原4 ℃过夜包被，5%脱脂奶粉溶液37 ℃封闭2 h，待检血清1 ∶400稀释、37 ℃孵育30 min，酶标羊抗鼠IgG二抗1 ∶24 000稀释、37 ℃孵育30 min，显色15 min。试验确定阴阳性临界值OD450 nm=0.418，可检测到抗体的最大稀释度为1 ∶3 200，批内和批间重复变异系数均小于10%，并具有较好的特异性。28份血清与Western blot结果符合率为96.42%。ELISA OD450 nm值与中和抗体效价log2相关系数R2=0.878 5。综上所述，本研究建立的PoRV抗体间接ELISA具有较高的特异性和敏感性，可应用于PoRV的临床血清样本抗体检测。

来源：2024年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2024年第9期