畜牧兽医学报

作者：冯旭飞, 亓宇翔, 于瀚哲, 张正洲, 王如嘉, 孟闯, 董魁

单位：1. 山西医科大学公共卫生学院, 太原 030001；2. 山西医科大学煤炭环境致病与防治教育部重点实验室, 太原 030001；3. 扬州大学兽医学院(比较医学研究院), 扬州 225009；4. 扬州大学江苏省人兽共患病重点实验室, 扬州 225009

关键词：Rab32,禽偏肺病毒C型,复制,表达水平,互作

基金：江苏省高等学校基础科研(自然科学)面上项目(21KJB230009);江苏省人兽共患病学重点实验室开放课题(R2106);高等学校学科创新引智计划资助(D18007);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD);山西省高等教育“百亿工程”科技引导专项(BYBLD003-07);山西省高等教育“百亿工程”科技引导专项(BYBLK007-03)

为探究Rab32对禽偏肺病毒C型(aMPV/C)复制的影响, 将A549细胞接种aMPV/C后进行激光共聚焦显微镜观察, 并用Image J软件对所采集图像的共定位系数进行分析; 将pCMV-Flag-Rab32、pCMV-Flag、siRab32以及siNC分别转染A549细胞后接种aMPV/C, 分别采用荧光定量PCR(qPCR)、Western blot和TCID50检测收集样品中aMPV/C N基因转录水平、aMPV/C N和Rab32蛋白的表达水平以及病毒效价; 将pCMV-mcherry-Rab32分别与可融合表达GFP的aMPV/C结构蛋白的重组载体共转染A549细胞, 24 h后采用激光共聚焦显微镜观察; 将pCMV-Flag-Rab32分别与可融合表达GFP的aMPV/C结构蛋白的重组载体共转染HEK293T细胞, 36 h后收集细胞样进行免疫共沉淀试验。结果显示, Rab32与aMPV/C在细胞质中存在明显的共定位; Rab32与aMPV/C的共定位系数极显著高于未接毒组(P<0.01);过表达Rab32后aMPV/C N基因转录水平, Rab32和N蛋白表达水平以及病毒效价均极显著升高(P<0.01);而干扰Rab32表达后, N基因的转录水平, Rab32和N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著降低(P<0.01);Rab32可与多个aMPV/C蛋白(N、F、M、G、SH、P、M2-1、M2-2、L1、L2、L4)在细胞质中存在共定位, 而与L3蛋白无明显共定位; IP样品中表达N和M2-2蛋白的样品出现特异性条带, 其他蛋白无特异性条带。综上表明Rab32可能通过与aMPV/C N和M2-2蛋白之间的互作从而调控病毒的复制。相关研究结果可为深入阐明Rab32调控aMPV/C复制的分子机理提供研究基础。

来源：2024年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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