畜牧兽医学报

作者：马金锐, 史文静, 田常青, 董志杰, 赵学慧, 芝吉, 曹青, 魏衍全, 宋维丽, 薛惠文, 苟惠天

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070；2. 临洮县龙门镇畜牧兽医站, 临洮 730500

关键词：产单核细胞李氏杆菌,内化素G,单克隆抗体,酶联免疫吸附试验

基金：国家自然科学基金项目(31960726);国家自然科学基金项目(32060822);国家自然科学基金项目(31560700);甘肃省自然科学基金(21JR7RA482);甘肃农业大学青年导师扶持基金项目(GAU-QDFC-2020-10);甘肃省重点研发计划项目(20YF8FA136);2022年现代丝路寒旱农业科技支持项目(GSLK-2022-17);张家川揭榜挂帅项目(ZC-STK-2023A-030)

本研究旨在建立一种快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法。通过PCR扩增产单核细胞李氏杆菌(LM)内化素G(InlG)基因, 构建pET-32a-InlG重组表达载体, 通过诱导表达获得InlG重组蛋白, 将其纯化后免疫小鼠(100 μg·只-1), 经细胞融合、克隆和筛选共获得了3株阳性杂交瘤细胞株, 分别命名为1D2、1D2-1和2H10。经鉴定, 其分泌抗体亚型均为IgG1。利用制备的1D2-1作为捕获抗体, 产单核细胞李氏杆菌兔多抗作为检测抗体, 初步建立检测产单核细胞李氏杆菌的双抗体夹心ELISA方法。Western blot结果显示3株单克隆抗体(mAb)与InlG均可发生特异性反应。双抗体夹心ELISA方法的特异性试验结果显示, 与沙门菌、大肠杆菌、枯草杆菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌均不发生反应。灵敏度试验结果显示, 该方法检测LM纯培养物的检测限为1.0×106 CFU·mL-1。重复性试验结果显示, 各组变异系数在5%~10%之间(< 10%)。综上, 本研究利用抗内化素G蛋白的mAb和兔多抗建立了双抗体夹心ELISA方法, 该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性, 可用于产单核细胞李氏杆菌感染的快速诊断检测。

来源：2024年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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