畜牧兽医学报

作者：王梦迪, 王昱旻, 张震, 鲁秀香, 王恒, 樊文杰, 姚晨, 刘鹏翔, 马延杰, 褚贝贝, 王江, 杨国宇

单位：1. 河南农业大学农业农村部动物生化与营养重点开放实验室，郑州 450046；2. 河南牧业经济学院食品与生物工程学院，郑州 450046

关键词：肿瘤易感基因101,伪狂犬病病毒,PK15细胞

基金：河南省科技攻关(232102310381);河南牧业经济学院博士科研启动资金资助(2022HNUAHEDF033);国家重点研发计划(2021YFD1301201)

本研究旨在使用慢病毒包装敲低技术构建敲低肿瘤易感基因(tumor susceptibility gene 101，TSG101)的慢病毒质粒及稳转PK15细胞系，并验证该敲低细胞系对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)感染的影响。针对TSG101基因构建并筛选, 成功获得重组慢病毒，用获得的重组慢病毒感染PK15细胞，并使用嘌呤霉素进行筛选，获得稳转敲低TSG101基因的PK15细胞系。通过Real-time PCR以及Western blot方法对所构建的细胞系进行编辑效率检测；使用CCK-8法对筛选出的细胞系进行细胞活力及生长状况检测；通过流式细胞术、Real-time PCR、Western blot以及子代病毒滴度方法验证该细胞系对PRV复制的影响；最后对PRV的吸附、进入以及复制阶段的试验探究敲低TSG101基因对于PRV感染有影响的阶段。结果表明，1)本研究所构建的细胞系中TSG101的表达明显降低，并将该细胞系命名为sh-TSG101细胞系；2)细胞活性检测结果显示，敲低TSG101基因对细胞活性及生长情况无显著影响；3)使用PRV-GFP、PRV-QXX感染sh-TSG101，体外试验证明敲低TSG101对PRV的增殖有显著的抑制作用。4)病毒的吸附、进入以及复制试验证明，敲低TSG101在PRV的复制阶段有明显的抑制作用。综上，本研究成功构建TSG101基因敲低的PK15细胞系，体外敲低TSG101能够显著抑制PRV增殖，为PRV等DNA病毒性疾病的防控提供了新思路，并为进一步探究TSG101调控PRV感染的分子机制奠定了基础。

来源：2024年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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