畜牧兽医学报

作者：吕林丹, 牟豪, 胡霞, 刘明妮, 李绍梅, 李星, 宋振辉, 杨柳

单位：1. 西南大学, 重庆 402460；2. 国家生猪技术创新中心, 重庆 402460；3. 重庆市畜牧科学院, 重庆 402460

关键词：猪传染性胃肠炎病毒,基础型RAA,荧光型RAA,可视化检测

基金：国家生猪技术创新中心先导科技项目(NCTIP-XD/B11);国家动物疫病长期性观测监测项目(ZX06S2302)

本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification，RAA)检测方法。通过基因组序列比对，选择TGEV S基因中特定片段为检测靶标，构建重组质粒pUC57-S，设计并筛选RAA引物和探针；建立RAA检测方法；评价该方法灵敏度、特异性和重复性；运用该方法检测腹泻临床样品，与荧光定量PCR方法比较检测结果的符合率。结果确定最佳引物对F2/R1和探针PF2；该方法在40 ℃恒温条件下，30 min即可完成反应；荧光型RAA法最低检出限可达1.34×101 copies·μL-1；与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪呼吸道冠状病毒等常见猪源病毒核酸无交叉反应；采用该方法检测107份临床样本，阳性率为5.61%(6/107)，与荧光定量PCR法相比较，检测结果一致。本研究成功建立了一种灵敏、特异、可视化的RAA检测方法，可摆脱对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖，为临床检测TGEV提供良好的技术基础。

来源：2024年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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