畜牧兽医学报

作者：梁小娟, 李雨爽, 李莹莹, 王守伟

单位：中国肉类食品综合研究中心，北京食品科学研究院，北京 100068

关键词：北京黑猪,脂肪前体细胞,成脂诱导分化,成熟脂肪细胞,三维培养,细胞培育肉

基金：国家重点研发计划项目(2021YFC2101404);中国工程院战略研究与咨询项目(2023-XZ-79)

旨在建立北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化培养体系，为研究猪脂肪沉积的分子机制提供试验材料，为生物培育肉的制备提供技术指导。本研究采集1头7日龄健康的北京黑猪公猪的颈部皮下脂肪组织，使用机械法联合Ⅰ型胶原酶消化法分离脂肪前体细胞。对获得的脂肪前体细胞进行形态观察、生长曲线绘制、免疫荧光鉴定、成脂诱导分化、油红O染色、BODIPY染色、甘油三酯含量测定及使用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测成脂分化相关基因的表达。结果表明，分离的北京黑猪脂肪前体细胞贴壁后呈长梭形，细胞生长曲线呈S型。免疫荧光结果表明，PREF1表达为阳性，表明分离的细胞的确为脂肪前体细胞。在相同的诱导试剂组合条件下，使用10% FBS比2% FBS成脂诱导分化效果更好。在相同血清浓度的情况下，鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用的细胞分化效果较好。分化8 d的细胞中出现大量的脂滴，脂滴经油红O染色呈红色，经BODIPY染色呈绿色。且分化8 d的细胞中甘油三酯的含量显著升高(P < 0.001)。qPCR结果显示，PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化2 d时表达量均显著升高(P < 0.05)，4~6 d达到高峰，8 d时表达量降低。Western blot结果表明，PPARγ、CEBPα、FABP4、APN在细胞分化过程中表达逐渐上调。PREF1在细胞分化过程中表达逐渐下调。在三维培养情况下，使用10% FBS，鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用也能使脂肪前体细胞分化为成熟的脂肪细胞，分化8 d的细胞中脂滴经BODIPY和油红O染色后分别呈绿色和红色，且PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化8 d的细胞中的表达量显著上调(P < 0.001)。综上所述，本研究成功建立了北京黑猪脂肪前体细胞的分离与培养体系，并筛选出适合二维和三维培养的成脂诱导分化方法，为进一步研究猪脂肪沉积的分子机制和改善肉品质奠定基础，也为细胞培育肉的制备提供技术指导。

来源：2024年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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