畜牧兽医学报

作者：任慧杰, 马勋, 王静, 刘彩霞, 曾东东, 寇丽君, 史唯地, 吕双飞, 钱瑞宣, 高盛杰

单位：石河子大学动物科技学院, 石河子 832003

关键词：产单核细胞李氏杆菌,双缺失株,黏附侵袭,胞内增殖,载菌量,生长曲线

基金：国家自然科学基金(32160834);国家自然科学基金(32160833);国家自然科学基金(32260895)

旨在构建食源性产单核细胞李氏杆菌毒力岛4(LIPI-4)中的抗转录终止子(Lm4b_02325)和未知蛋白(Lm4b_02326)基因的双缺失株，研究Lm4b_02325/26基因对产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes，LM)的部分生物学特性的影响。利用同源重组技术构建LM928ΔLm4b_02325/26双缺失株，测定LM928和LM928ΔLm4b_02325/26双缺失株在脑心浸出液肉汤(brain heart infusion broth，BHI)、不同EtOH浓度、不同NaCl浓度、不同pH、不同温度下的D600 nm，绘制生长曲线；RT-qPCR检测双基因缺失前后体外BHI培养环境下部分毒力因子转录水平；平板计数测定其对鼠巨噬细胞RAW264.7的黏附、侵袭与胞内增殖情况；感染C57BL/6小鼠后检测肝、脾、脑组织中的细菌数量。结果表明，成功构建具有遗传稳定性的双缺失株LM928ΔLm4b_02325/26。在含0.5%~10% NaCl或3%~4.5% EtOH的培养基中，双缺失株与野毒株生长没有明显差异，在pH=5条件下，双缺失株的生长率显著高于野毒株，pH=9条件下双缺失株的生长率显著低于野毒株。在不同温度(4 ℃、37 ℃、42 ℃)BHI培养基中，双缺失株与野毒株生长没有明显差异。Lm4b_02325/26基因双缺失株在BHI培养基中毒力因子hly、inlC和PlcA极显著上调(P < 0.01)，mpl、inlB、actA、inlP、PlcB、prfA、SigB、iap和inlA极显著下调(P < 0.01)；双缺失株对RAW264.7细胞的黏附率(14.86%)和侵袭率(2.23%)明显低于野毒株的黏附率(22.93%)和侵袭率(4.28%)(P < 0.01)；3、6、12 h时胞内增殖数量极显著低于野毒株(P < 0.01)；双缺失株与野毒株感染小鼠后，载菌量在肝、脾中没有显著差异，在脑组织中双缺失株载菌量为104，高于野毒株的103.07，差异极显著(P < 0.01)。综上认为，LIPI-4的Lm4b_02325和Lm4b_02326基因参与LM毒力因子的表达和脑组织的定植能力，与弱酸强碱条件下适应力及对RAW264.7细胞的黏附、侵袭和胞内增殖有关。本研究为LIPI-4的功能研究奠定了基础。

来源：2024年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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