畜牧兽医学报

作者：辛航阔, 谢青青, 刘坤, 林圣宇, 陈炜, 郑小惠, 朱婷

单位：福建农林大学动物科学学院 闽台动物病原生物学实验室, 福州 350002

关键词：猪,NK细胞,CD56,单克隆抗体,抗原表位

基金：福建农林大学科技专项创新基金项目(KFb22065XA)

CD56作为NK细胞的重要表面分子，在NK细胞的发育、亚群分型和功能发挥等方面发挥重要的作用。因此，为了便于筛选不同亚群的猪NK细胞并探究其生物学功能，本研究制备了猪CD56单克隆抗体并对其抗原表位进行了初步鉴定。首先，通过生物信息软件预测并选取猪CD56蛋白胞外区的优势抗原表位的氨基酸序列(50-499aa)，利用原核表达系统表达猪CD56胞外区的优势抗原表位蛋白并进行纯化和复性，之后，将猪CD56重组蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合、亚克隆等试验，获得一株稳定分泌猪CD56单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1G8。Western blot结果显示，制备的猪CD56单抗可以与猪脑和脾总蛋白发生特异性结合；为了进一步验证CD56单抗的特异性，作者分离了猪外周血NK细胞，以制备的猪CD56单抗作为一抗进行间接免疫荧光试验，结果显示，制备的单抗能够与NK细胞膜特异性结合。最后，为了进一步探究单抗识别的抗原表位，作者将选取的猪CD56基因进一步截短为四个截短体(50-192 aa、193-294 aa、295-397 aa、398-499 aa)并构建真核表达重组质粒，然后转染至293T细胞进行真核表达，Western blot和间接免疫荧光结果显示，制备的CD56单抗识别的抗原表位为猪CD56蛋白的193-294 aa。综上，本研究成功制备了猪CD56单克隆抗体，并对其特异性及抗原表位进行了初步鉴定，对猪NK细胞亚群的筛选及探究猪NK细胞的生物学功能具有重要意义。

来源：2024年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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