畜牧兽医学报

作者：黄金, 李思远, 毛立, 蔡旭航, 谢玲玲, 王府, 周华, 李基棕, 李彬

单位：1. 江苏省农业科学院兽医研究所, 农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室, 南京 210014;2. 南京农业大学 动物医学院, 南京 210095;3. 江苏大学生命科学学院/食品与生物工程学院, 镇江 212013;4. 贵州省种畜禽种质测定中心, 贵阳 550018;5. 黔西市动物疫病预防控制中心, 黔西 551500;6. 西北农林科技大学动物医学院, 杨凌 712100

关键词：牛冠状病毒,昆虫杆状病毒表达系统,S1蛋白,间接ELISA

基金：“十四五”国家重点研发计划(2021YFD1801101)；贵州省种业发展项目(肉牛遗传改良与高效养殖技术研究)

为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白，并作为包被抗原，建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法，应用于临床样品检测。结果显示，S1蛋白大小约100 ku，可表达于昆虫High5细胞培养基上清，经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好；经反应条件优化，确定抗原包被浓度为0.125 μg·mL-1，血清稀释度为1∶200；采用1%明胶，于37 ℃封闭3 h；血清样品于37 ℃孵育30 min；酶标二抗的稀释度1∶25 000，37 ℃孵育45 min；37 ℃避光显色13 min；临界值为0.297；经检验，该方法特异性良好；批间及批内变异系数均小于10％。当临界值为OD450 nm为0.297时，若以IFA为标准，ELISA的敏感性为96.88%(31/32)，特异性为87.50%(7/8)，与IFA具有很强的一致性(κ=0.844，P<0.01)；若以中和试验为标准，ELISA的敏感性为100.00%(31/31)，特异性为88.89%(8/9)，与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925，P<0.01)。采用该方法对303份牛血清进行检测，BCoV阳性率为74.91%。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强，敏感性高，重复性好，可用于BCoV的血清学调查和临床诊断，并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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