畜牧兽医学报

作者：韩阳, 关帅印, 李振, 周赛赛, 袁红根, 宋云峰

单位：华中农业大学动物医学院, 武汉 430070

关键词：猪圆环病毒3,Rep蛋白,核酸内切酶活性,ATPase活性,解旋酶活性

基金：国家自然科学基金项目(31972658)

Rep蛋白对猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)的复制具有重要作用。为分析PCV3 Rep蛋白的核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性，作者使用镍亲和层析法纯化相应的重组蛋白，通过优化反应条件，建立Rep蛋白酶活性的测定方法，并探究Rep蛋白关键活性位点。结果表明，Rep蛋白在体外具有核酸内切酶活性、ATPase活性和解旋酶活性。当蛋白浓度为1.6 μmol·L-1，Mg2+浓度为1.0 mmol·L-1，37 ℃反应75 min时其ATPase活性达到最佳。当蛋白浓度为7 μmol·L-1，Mg2+浓度为12.5 mmol·L-1，37 ℃反应60 min时其解旋酶活性达到最佳。Y89为Rep蛋白核酸内切酶活性的关键位点，K173、D210、N250为ATPase活性和解旋酶活性的关键位点。本研究建立了PCV3 Rep蛋白酶活性分析的方法，初步揭示了该蛋白的主要功能位点，为Rep蛋白的功能研究以及基于Rep蛋白活性的抗病毒药物研究奠定了基础。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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