畜牧兽医学报

作者：马茹梦, 赵玉梁, 马明爽, 国桂海, 刘芯孜, 李佳璇, 崔文, 姜艳平, 单智夫, 周晗, 王丽, 乔薪瑗, 唐丽杰, 王晓娜, 李一经

单位：1. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030;2. 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室, 哈尔滨 150030

关键词：猪流行性腹泻,S1蛋白,副干酪乳酪杆菌,罗伊氏黏液乳杆菌,约氏乳杆菌,口服疫苗,免疫分析

基金：“十四五”国家重点研发项目(2022YFD1800800)；国家自然科学基金青年项目(32102707)；黑龙江省自然科学基金联合引导项目(LH2021C043)

旨在比较猪源副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)作为口服疫苗载体，表达外源蛋白刺激仔猪产生免疫能力的强弱，以期选取合适乳酸菌作为受体菌载体。本研究首先体外鉴定表达PEDV S1蛋白的重组猪源副干酪乳酪杆菌(pPG-T7g10-S1/L. paracasei 27-2)、猪源罗伊氏黏液乳杆菌(pPG-T7g10-S1/L. reuteri J31)、猪源约氏乳酸杆菌(pPG-T7g10-S1/L. johnsonii 6332)的耐酸耐胆盐能力，考察3株重组菌的抗逆性。结果表明，3株重组菌均能够耐受酸和胆盐环境，且与其野生型菌株没有显著差异。接下来为比较3株重组菌的免疫效果，口服免疫初生仔猪后，利用间接ELISA和中和试验检测仔猪产生的特异性抗体水平及其中和活性；并测定免疫后仔猪血清和肠黏膜中各细胞因子水平。结果显示，口服免疫后，与对照组相比，3株免疫组仔猪血清IgG抗体和鼻拭子、肛拭子、肠黏液中SIgA抗体水平均显著升高，且可持续至第28天左右，其中pPG-T7g10-S1/L. paracasei 27-2组诱导产生的抗体水平显著高于其他两组免疫组(P＜0.05)；仔猪产生特异性的IgG和 SIgA对 PEDV均具有中和活性。仔猪血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平和对照组相比显著升高(P＜0.05)，但3株重组菌组间细胞因子水平未见明显差异；仔猪空肠黏膜中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17、IL-21、TGF-β、APRIL和BALL水平与对照组相比有所升高，且pPG-T7g10-S1/L. paracasei 27-2 组IL-4、IL-5、IL-6、TGF-β、IL-17、IL-21和BALL相比其他组显著升高(P＜0.05)。综上所述，本研究分别将质粒组成型表达PEDV主要保护性抗原S1的重组猪源副干酪乳酪杆菌、猪源罗伊氏黏液乳杆菌和猪源约氏乳酸杆菌口服免疫仔猪，结果显示能够刺激机体产生针对PEDV的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫，且相较于其他2株重组菌，重组猪源副干酪乳酪杆菌pPG-T7g10-S1/L. paracasei 27-2的口服免疫效果最好。该试验结果为构建更为有效的乳酸菌口服疫苗提供了科学数据。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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