畜牧兽医学报

作者：吕亚迪, 杨洁, 谢文婷, 徐婷, 陈瑞爱

单位：1. 华南农业大学兽医学院, 广州 510642;2. 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心, 肇庆 526238;3. 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司, 肇庆 526238;4. 肇庆大华农生物药品有限公司, 肇庆 526238

关键词：H9N2亚型禽流感病毒,HA蛋白,新城疫病毒,免疫原性,载体疫苗,免疫保护效率

基金：广东省重点领域研发计划项目，鸡传染性支气管炎和禽流感病毒样颗粒疫苗的研制及应用(2021B0707010009)

旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒，有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗，为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路，对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术，以rDHN3-mF为骨架，在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白，获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性，将重组病毒以106 EID50·只-1剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体，在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示：重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生；Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白；重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征；重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体；攻毒保护试验结果：重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果；喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒；气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d，rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV，为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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