畜牧兽医学报

作者：徐朕宇, 邓肖玉, 王月丽, 孙灿, 吴澳迪, 曹剑, 易继海, 王勇, 王震, 陈创夫

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832000;2. 绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心, 石河子 832000;3. 天康生物制药有限公司, 乌鲁木齐 830011;4. 石河子大学 动物疾病防控兵团重点实验室, 石河子 832000

关键词：布鲁氏菌,BtpA,生物学特性,免疫原性

基金：国家自然科学基金项目(32002245；U1803236)

布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响，并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失，通过qRT-PCR检测布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株中的BtpA mRNA表达水平，并探究布鲁氏菌A19株和A19ΔBtpA缺失株在生长曲线、胞内生存、黏附侵袭和体外应激方面的差异。此外，将A19株和A19ΔBtpA缺失株免疫小鼠，在免疫后的第7、14、21、28和35天使用间接ELISA检测小鼠体内的布鲁氏菌特异性抗体水平；通过ELISpot检测免疫第21天时小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达水平，利用流式细胞术测定了小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ阳性CD4+、CD8+T淋巴细胞以及CD4+、CD8+T淋巴细胞的分类情况。结果表明：成功构建了A19ΔBtpA缺失株，A19ΔBtpA缺失株中BtpA的转录水平显著低于A19株，A19ΔBtpA缺失株与亲本株在生长曲线、胞内生存和黏附侵袭方面呈现相似的趋势。而体外应激试验显示，高渗应激条件下A19ΔBtpA缺失株的存活菌量明显低于A19株(P＜0.05)。免疫原性研究中，与PBS组相比，A19组和A19ΔBtpA组均可极显著诱导小鼠产生布鲁氏菌特异性抗体(P＜0.01)；与A19组相比，A19ΔBtpA组淋巴细胞IFN-γ表达水平显著升高(P＜0.05)，使小鼠产生的IFN-γ阳性CD4+、CD8+T淋巴细胞以及CD4+/CD8+T细胞比值显著增高(P＜0.05)。BtpA基因缺失不会影响布鲁氏菌A19体外胞内增殖，但可能参与布鲁氏菌抗高渗环境能力相关。此外，A19ΔBtpA缺失株比A19株更好地诱导Th1型免疫应答，诱导宿主产生与A19株相当的IgG特异性抗体，具有布鲁氏菌基因缺失疫苗的潜力。该研究将为进一步探究布鲁氏菌的致病机制和开发基因缺失株疫苗提供理论基础和数据支持。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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