畜牧兽医学报

作者：费国庆, 宁致远, 赵泽芳, 刘艳秋, 刘腾飞, 李贤, 丛日华, 陈鸿, 陈树林

单位：西北农林科技大学动物医学院, 杨凌 712100

关键词：奶牛,黄体细胞,分离培养,生物学特性

基金：国家自然科学基金项目(32172811；32002242)

旨在研究妊娠期奶牛黄体细胞的分离、纯化、鉴定及体外培养生物学特性。本研究通过采集健康荷斯坦奶牛的妊娠期黄体组织，利用Ⅱ型与Ⅳ型胶原酶联合消化法分离奶牛黄体细胞(bovine luteal cells, BLCs)，通过Percoll不连续密度梯度离心法纯化获得高纯度的BLCs。运用3β-HSD活细胞染色法、油红O脂滴染色法鉴定BLCs的纯度，借助免疫组织化学染色法、免疫荧光染色检测BLCs特异性标志物催产素和突触素。ELISA法检测细胞培养上清液中孕酮；G显带核型分析BLCs染色体、CCK-8法测定BLC生长曲线和血清依赖性结合流式细胞术检测细胞周期分析BLCs的体外培养特性。结果表明，1)利用胶原酶消化法和Percoll不连续密度梯度离心法可一次性分离纯化获得大量高纯度的BLCs；2)3β-HSD染色、油红O染色结果显示，分离纯化所得BLCs细胞类型均匀，其形态呈不规则多边形的典型上皮细胞样，胞核大，胞质丰富，有小脂滴弥散分布；3)免疫荧光结果表明，BLCs可表达催产素和突触素等黄体细胞的特异性标志物；4)BLCs培养上清中孕酮的浓度呈时间依赖性；5)核型分析结果显示，黄体细胞由30对染色体组成，包括29对常染色体和一对XX性染色体，CCK-8及流式结果显示,BLCs在体外培养过程中具有稳定的增殖活性。综上所述，本研究成功分离纯化获得具有典型生物学特性的高纯度BLCs，并提供了一套完善的BLCs分离、纯化、鉴定及体外培养的方法，可为体外研究黄体的发育、退化及其功能调控提供稳定的细胞模型和技术参考。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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