畜牧兽医学报

作者：李秋云, 田芯源, 廖文圣, 张焕容, 任玉鹏, 杨发龙, 朱江江, 向华

单位：1. 西南民族大学动物医学四川省高等学校重点实验室, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室, 成都 610041

关键词：山羊,SOCS2,细胞增殖,细胞周期,细胞凋亡

基金：西南民族大学研究生创新型科研项目(YB2023338)；四川省科技计划项目(2023YFN0043)；四川省自然科学基金项目(2022NSFSC0082)；四川省科技计划项目(23ZDYF3070)；四川省畜禽育种攻关项目(2021YFYZ0003)；浙江省科技计划项目(2022C04017)

细胞因子信号转导抑制因子2 (suppressor of cytokine signaling 2，SOCS2)在动物体内参与调节多种生理和病理过程，如细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、肿瘤和炎症反应等。本研究在首次克隆山羊SOCS2基因的基础上，研究过表达和干扰SOCS2表达对山羊鼻甲骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。以1周岁的健康简州大耳羊(6只)的心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、大肠、小肠和山羊鼻甲骨细胞共9个样本为模板，采用反转录PCR技术克隆山羊SOCS2基因CDS区序列，并进行序列分析。利用RT-qPCR技术检测SOCS2基因在不同组织中的表达。将克隆得到的SOCS2基因CDS区连接载体构建真核表达载体pcDNA3.1-SOCS2。根据山羊SOCS2基因序列设计合成并筛选有效siRNA。利用LipofectamineTM 3000试剂将pcDNA3.1-SOCS2和siRNA片段分别转染至鼻甲骨细胞，采用蛋白免疫印迹技术检测 SOCS2蛋白表达，MTT法检测SOCS2对细胞增殖的影响，流式细胞术检测SOCS2对细胞周期和凋亡的影响，并利用RT-qPCR技术检测细胞周期相关基因p21、CDK2和凋亡相关基因 Caspase3、Caspase7、PARP1、p53、Bax、BCL2L11 和Bcl-2的转录水平。结果显示，成功扩增山羊SOCS2 基因序列，总长为1 065 bp，CDS 区长为597 bp，编码198 个氨基酸残基。SOCS2基因在肝中表达水平最高；SOCS2可以抑制细胞增殖。成功构建真核表达载体pcDNA3.1-SOCS2，且该基因在鼻甲骨细胞内成功表达。SOCS2过表达可导致G2/M+S期细胞数量显著增加，且下调CDK2和p21基因的mRNA表达；促进细胞凋亡，且上调Caspase3、Caspase7、Bax、p53、BCL2L11、Bcl-2 基因的mRNA表达，PARP1表达水平无显著变化。而干扰SOCS2表达后，G0/G1 期细胞数量显著升高，且CDK2和p21基因的mRNA表达上调；细胞凋亡被抑制，且Caspase3、Bax、p53、PARP1基因的mRNA表达下调，Caspase7、BCL2L11、Bcl-2基因表达水平无显著变化。综上所述，SOCS2可将细胞周期阻滞在G2/M+S期，促进细胞凋亡，抑制细胞增殖。研究结果为全面揭示山羊SOCS2功能提供试验数据。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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