畜牧兽医学报

作者：李鹏飞, 高桂琴, 周广青, 吴锦艳, 颜新敏, 曹小安, 何继军, 袁莉刚, 尚佑军

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730046;3. 白银市农业综合行政执法队, 白银 730900

关键词：山羊地方性鼻内肿瘤病毒,羊内源性逆转录病毒,TaqMan,荧光定量RT-PCR

基金：国家现代农业产业技术体系项目(CARS-39-04B)；白银市2023年度高层次人才(团队)引进项目(BYTIP2023-10)；甘肃省科技特派团专项(22CX8NA012)；甘肃农业大学实践项目(GSAU-JSFW-2023-07)

山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor，ENT)是山羊的病毒性传染病，由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats，ENTV-2)所引起，感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变，已在世界范围内广泛存在，对山羊养殖业造成严重的经济损失。为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法，本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因(MT254061.1)保守区域设计引物和TaqMan探针，建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法，并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证。结果显示，重组质粒标准品模板浓度为6.30×102～6.30×107 copies·μL-1呈现良好的线性关系，相关系数R2为0.996 5，扩增效率为110%，线性方程的斜率为-2.953，最低检测限度为6.30×101 copies·μL-1；组内变异系数和组间变异系数均小于2%，重复性好；与口蹄疫病毒((foot-and-mouth disease virus, FMDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus)、羊内源性逆转录病毒(endogenous retroviruses)等均无交叉反应，表明该方法具有很好的特异性。利用本研究所建立的TaqMan 探针实时荧光定量 RT-PCR 检测方法对29份临床样品进行检测，该方法较普通 PCR 方法的检出率更高。综上表明，本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan 探针实时荧光定量 RT-PCR 检测方法，为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。

来源：2024年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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