畜牧兽医学报

作者：罗小芬, 谢晓东, 赵超, 胡茜, 王永璇, 冉芳菲, 胡鹏飞, 文明, 朱二鹏, 程振涛

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室, 贵阳 550025;3. 盘州市动物疫病预防控制中心, 盘州 553500

关键词：牛支原体,黏附蛋白,原核表达,筛选

基金：贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2021]一般161号；黔科合支撑[2023]一般077号)；贵州省优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才[2021]5646号)；大学生创新创业训练计划项目(贵大[省]创字2022[099]号)

牛支原体(Mycoplasma bovis，M. bovis)是引起牛乳腺炎和小牛肺炎等多种牛病的重要病原体。黏附蛋白通常被认为在该生物体的致病机制中起着核心作用。因此，本研究旨在以牛支原体株贵州株(GZ-2)的4个假定蛋白为研究对象，分别命名为M27、M32、M498、M663；分别在大肠杆菌感受态细胞DE3(BL21)中进行原核表达及纯化、亚细胞定位及黏附性研究。结果显示：成功表达和纯化重组M27、M32、M498和M663蛋白；M27、M32和M498蛋白均在牛支原体总蛋白、胞膜蛋白与胞质蛋白中均出现特异印迹条带，而M663未被检测到；共聚焦激光扫描显微镜下的免疫染色结果显示，M27、M32、M498和M663蛋白和牛支原体都能黏附在胚胎牛肺细胞(EBL)上，兔抗M27、M32、M498和M663血清抗体能够抑制蛋白M27、M32、M498和M663对EBL细胞的黏附，也能抑制牛支原体对EBL细胞的黏附。流式细胞术分析结果与其一致，得到了进一步证实。综上所述，M27、M32和M498蛋白是牛支原体的黏附相关蛋白，而M663在Western blot中未被检测到，但它仍能黏附在EBL细胞上，并且其抗血清可抑制牛支原体对EBL细胞的黏附。这为诊断牛支原体相关疾病和开发预防性疫苗选择目标蛋白提供参考依据。

来源：2024年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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