畜牧兽医学报

作者：江锦秀, 张靖鹏, 林裕胜, 刘维巍, 胡奇林, 万春和

单位：1. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福州 350013;2. 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院), 福州 350002

关键词：绵羊肺炎支原体,Hsp70基因,TaqMan实时荧光定量PCR方法,序列分析

基金：福建省科技计划项目(2020R1026009；2020J06029；2021R1026006；2023R1077)；福建省农业科学院科技计划项目(XTCXGC2021008；CXTD2021007-2；CXPT202108)

热休克蛋白70 (heat shock protein 70，Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白，是机体内高度保守的生物分子，但在种间差异大，可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法，并进一步了解其遗传变异情况，本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征，设计特异性的引物及探针，建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定，并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示，建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00，扩增效率为96.0%，斜率为-3.411，Y轴截距为37.29。特异性强，与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp. capri, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种( Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应；敏感性高，最低检测限为5.72 copies ·μL-1；重复性优，组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp，与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%；进一步分析发现，山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明，其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上，本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现，不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高；遗传演化分析证实，Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持，更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

来源：2024年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2024年第4期