畜牧兽医学报

作者：王家丽, 杨帆, 邵文华, 黄梦瑶, 曹伟军, 蒲秀瑛, 张伟, 郑海学

单位：1. 中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室, 兰州 730000;2. 兰州理工大学 生命科学与工程学院, 兰州 730050;3. 甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 兰州 730046

关键词：CRISPR/Cas9,Tollip基因,细胞系,口蹄疫病毒

基金：国家自然科学基金项目(32102639；32072831)；国家重点研发计划项目(2021YFD1800300)；甘肃省杰出青年基金(21JR7RA026)；兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金(lzujbky-2022-ey20)；甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001)；国家生猪产业技术体系(CARS-35)

旨在探究Toll作用蛋白(toll-interacting protein, Tollip)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)增殖的影响，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tollip基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney cell line, PK-15)，并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果，然后利用CCK-8试剂盒测定Tollip缺失后细胞活力变化，确认敲除细胞与野生细胞无显著差异，用FMDV感染敲除细胞后，采用Western blot、间接免疫荧光、实时荧光定量和病毒滴度测定等方法测定病毒在敲除细胞系中复制情况。结果显示：感染FMDV后，敲除细胞与野生细胞相比，显著促进了病毒的复制。综上，在PK-15细胞上，成功构建Tollip缺失细胞系，且试验表明Tollip的缺失有助于FMDV的复制。研究结果为后续Tollip功能研究及抗病毒机制研究提供理论依据。

来源：2024年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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