畜牧兽医学报

作者：张宝戈, 黄雅琴, 蔡金双, 朱晨光, 李玉峰

单位：南京农业大学动物医学院, 农业农村部动物细菌学重点实验室, 南京 210095

关键词：猪圆环病毒3型,Cap重组蛋白,单克隆抗体,阻断ELISA

基金：“十四五”重点研发计划（2022YFD1800900）

旨在建立检测猪圆环病毒3型（PCV3）抗体的阻断ELISA方法，本研究利用原核表达的PCV3 Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体，经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清，计算阻断率（PI）的临界值，以此来确定该方法的判定标准：当PI≤28.30%时，判定结果为阴性；当PI≥35.05%时，判定结果为阳性；当28.30%<35.05%时，判定为可疑，重复一次试验后如果结果仍为可疑，则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）以及猪瘟病毒（CSFV）的阳性血清均无交叉反应；敏感性试验表明其检测效价可达到1：128；重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%；符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）比对的Kappa值达0.9，具有高度的一致性。综上所述，本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率，可用于后期进行PCV3抗体的检测，为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。

来源：2024年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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