畜牧兽医学报

作者：彭月梅, 叶状, 汪飞燕, 王礼跃, 冯永翠, 王乐乐, 候照峰, 许金俊, 陶建平, 刘丹丹

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009;2. 扬州大学 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：毒害艾美耳球虫,EnGPX,克隆表达,反应原性,免疫荧光定位

基金：国家自然科学基金(31972698;31602039);江苏高校优势学科建设四期工程项目(2022-2025);高等学校学科创新引智计划资助(D18007)

旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增EnGPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-EnGPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,EnGPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究EnGPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。

来源：2024年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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