畜牧兽医学报

作者：段香茹, 康佳, 杨若晨, 单新雨, 李太春, 赵雯, 张英杰, 刘月琴

单位：河北农业大学动物科技学院, 保定 071000

关键词：绵羊,卵巢颗粒细胞,L-半胱氨酸,增殖,凋亡,类固醇激素生成

基金：国家肉羊产业技术体系项目（CARS-38）

旨在探讨L -半胱氨酸（L-Cys）对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞（GCs）增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢，从优势卵泡（2~8 mm）中收集GCs，随机分为 5 组，每组 6 个重复，各组添加L-Cys 浓度分别为0、100、300、500和700 μmol·L-1，培养48 h 后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定，Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况，采用 ELISA 检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和 Western blot 分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因（PCNA、CCND2、CCNB1）、凋亡相关基因（BAX、Caspase-3、Bcl-2）和类固醇分泌相关基因的（STAR、3β-HSD、CYP11A1、CYP19A1）mRNA和蛋白表达的影响。结果显示，100、300和500 μmol·L-1组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力（P<0.05），并显著抑制其凋亡率（P<0.05）。添加300 μmol·L-1的L-Cys显著抑制了孕酮（P4， P<0.05）的分泌。进一步研究发现，300 μmol·L-1和500 μmol·L-1组的L-Cys 可以上调增殖相关基因（PCNA、CCND2、CCNB1）mRNA表达水平，其中300 μmol·L-1组的增殖蛋白（PCNA、CCND2、CCNB1）表达量显著上升（P<0.05）；100 μmol·L-1和300 μmol·L-1组显著下调凋亡相关基因（BAX、Caspase-3）mRNA（P<0.05）及其蛋白表达水平（P<0.05）。添加300 μmol·L-1 L-Cys 显著降低了类固醇相关基因（STAR、3β-HSD）mRNA及蛋白表达水平（P<0.05），添加100 μmol·L-1和300 μmol·L-1 L-Cys 显著升高了类固醇相关基因（CYP11A1、CYP19A1）mRNA（P<0.05）及其蛋白表达水平（P<0.05）。综上，L-Cys 通过上调基因PCNA、CCNB1、CCND2、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达、下调基因BAX、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达，促进绵羊GCs增殖，抑制其凋亡；L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P4 的分泌。

来源：2024年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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