畜牧兽医学报

作者：谢青云, 邢蕙萱, 于岩飞, 袁厅, 熊祺琰, 熊富强, 冯志新

单位：1. 江苏省农业科学院兽医研究所, 农业农村部兽用生物制品工程重点实验室, 南京 210014;2. 西藏农牧学院, 动物科学学院, 林芝 850400;3. 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心, 泰州 225300;4. 南京农学大学动物医学院, 南京 210095

关键词：猪肺炎支原体,解旋酶RuvA,DNA结合,多克隆抗体

基金：国家自然基金（32202812）；江苏省农业科技自主创新项目（CX（22）3195）

猪肺炎支原体的持续性感染问题频发，同源重组介导的抗原变异扮演重要角色。解螺旋酶RuvA调节霍利迪连接体变构是参与同源重组的关键步骤。鉴于此，本研究旨在原核表达猪肺炎支原体解螺旋酶RuvA重组蛋白，鉴定其DNA结合活性并制备多克隆抗体。试验通过分子克隆构建原核表达质粒pET21a-RuvA，经诱导表达和纯化获得RuvAMhp重组蛋白；免疫家兔制备抗RuvAMhp多克隆抗体，再利用间接ELISA和Western blot试验进行效价测定和特异性验证；利用凝胶迁移试验结合表面等离子共振技术分析RuvAMhp的DNA结合活性；利用凝胶迁移试验结合Western blot试验鉴定RuvAMhp的寡聚特性。结果显示：原核表达的RuvAMhp重组蛋白约为26 ku；制备的抗RuvAMhp多克隆抗体效价为1∶256 000，且具有良好的特异性；RuvAMhp具有较强的DNA结合活性，对霍利迪连接体的亲和力高达624.4 pmol·L-1（KD），并且主要以八聚体形式与其形成稳定复合物。通过RuvAMhp的原核表达、多克隆抗体制备及活性鉴定，为后续探索RuvA调解同源重组介导猪肺炎支原体抗原变异的分子机制奠定了基础。

来源：2024年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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