畜牧兽医学报

作者：白昀, 谢青云, 欧阳伟, 甘源, 袁厅, 赵东明, 步志高, 邵国青, 冯志新

单位：1. 江苏省农业科学院兽医研究所 农业农村部兽用生物制品工程重点实验室, 南京 210014;2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室, 哈尔滨 150069;3. 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心, 泰州 225300

关键词：非洲猪瘟,sIgA抗体,ELISA,早期诊断

基金：国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项（2019YFE0107300）；江苏省农业科技自主创新项目（CX（20）2035）

目前的非洲猪瘟病毒（ASFV）血清学检测方法存在因采血引起交叉感染风险、抗体转阳滞后影响检测敏感性等问题，因此建立一种无创采样且可实现早期诊断的血清学方法对于在临床上ASFV感染的诊断与监测有重要意义。本研究以人工合成的方式构建了pFastbac1-P30-His 重组表达载体，利用杆状病毒-昆虫细胞真核表达系统表达ASFV重组P30蛋白（SUMO-P30），用Ni柱亲和纯化后作为包被抗原，经过一系列条件优化，建立一种以猪口腔液中黏膜sIgA抗体为靶标的ASFV抗体间接ELISA方法。结果显示，真核重组表达的P30蛋白（SUMO-P30）约为 47 ku，Western blot 鉴定显示其具有良好的反应原性；经优化确定了ELISA最佳反应条件：包被量为1.0 μg·mL－1，5%脱脂乳为最佳样品稀释液，与待检口腔液的最佳混合比例为2∶8，样品反应时间为120 min，鼠抗猪 IgA-HRP 最佳稀释度为1∶5 000，反应时间为60 min，最佳显色时间为15 min。该方法检测ASFV感染口腔液抗体效价可达1∶32，与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒黏膜抗体阳性口腔液均无交叉反应，具有良好的敏感性和特异性。利用该方法和ASFV商品化ELISA血清抗体检测试剂盒，分别检测感染ASFV强毒株或人工致弱株后同一头猪不同时间点的口腔液和血清样品，口腔液中黏膜sIgA抗体在感染后3~5 d S/P值就显著提升，而血清抗体在监测期内未检测到转阳。检测人工感染或同圈感染自然变异株后不同时间点的口腔液和血清样品，本研究建立的方法与商品化非洲猪瘟病毒血清抗体检测试剂盒检测的阳性符合率为100%，阴性符合率为37.5%，总符合率为61.5%。综上，本研究建立了一种无需采血，以口腔液为样品的ASFV黏膜sIgA抗体ELSIA检测方法，可实现ASFV感染的无创、早期、敏感诊断，为ASFV的监测和防控提供新的技术支持和补充。

来源：2024年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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