畜牧兽医学报

作者：刘传霞, 王晓, 李雪雯, 鲍苗菲, 李婷婷, 陈欣, 翁长江, 郑君

单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 动物疫病预防控制国家重点实验室 国家非洲猪瘟专业实验室 基础免疫创新团队, 哈尔滨 150069

关键词：非洲猪瘟病毒,pE120R蛋白,原核表达,单抗隆抗体

基金：“十四五”国家重点研发计划项目（2021YFD1800100）；国家自然科学基金（32172874）

本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）衣壳蛋白pE120R，并制备单克隆抗体，为其功能研究提供材料。以pCAGGS-Flag-pE120R为模板扩增pE120R基因片段，构建原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R。将其转化BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导表达为可溶性pE120R蛋白，采用GST Beads纯化pE120R蛋白，免疫BALB/c小鼠，然后取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，采用间接ELISA方法筛选获得了1株能够稳定分泌pE120R单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果表明，成功构建了原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R，并获得较高纯度的pE120R蛋白。Western blot和间接免疫荧光（IFA）试验结果显示，pE120R单抗能特异性识别HEK293T细胞转染质粒表达的Flag-pE120R蛋白和肺泡巨噬细胞（PAMs）感染ASFV后表达的pE120R蛋白。该单抗的结合位点在30~60aa区域，并且该单抗亚类鉴定重链为IgG2a。本研究成功表达并纯化了可溶性的pE120R蛋白；制备了抗pE120R的单抗隆抗体，该抗体具有良好的特异性，为深入探讨ASFV pE120R蛋白的生物学功能奠定了基础。

来源：2024年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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