畜牧兽医学报

作者：周建浩, 王东方, 刘影, 王淑娟, 马震原, 谢彩华, 赵雪丽, 杨海波, 冯桂丹, 康台生, 胡煜锋, 李博文, 闫若潜

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046;2. 河南省动物疫病预防控制中心/河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室, 郑州 450008;3. 河南科技大学动物科技学院, 洛阳 471000;4. 上海市动物疫病预防控制中心, 上海 201103

关键词：猪流行性腹泻病毒,微滴式,数字PCR,方法,建立

基金：河南省重大科技专项课题（221100110600）；河南省重点研发专项（231111111300）；河南省现代农业产业技术体系（HARS-22-12-T）；河南省重点研发与推广专项（232102111053）

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）微滴式数字PCR（droplet digital PCR， ddPCR）定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV（MK862249.1）M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针；通过对反应体系和反应条件的优化，成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR（fluorescent quantitative real-time PCR，FQ-PCR）方法，将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR 方法；对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示：自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法；根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL-1，敏感性高于行业标准（SN/T 1699—2017）FQ-PCR方法（1.0×101 copies·μL-1）；模板浓度为1.0×100~1.0×104 copies·μL-1时，具有良好的线性关系（R2>0.99）；批内、批间变异系数（CV%）为1.52%~7.40%；对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性；分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测，ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为100%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测，为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

来源：2024年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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