畜牧兽医学报

作者：王燕星, 张雨时, 姬海港, 刘阳, 牛玉芳, 韩瑞丽, 刘小军, 田亚东, 康相涛, 李转见

单位：河南农业大学动物科技学院, 郑州 450046

关键词：鸡,骨骼肌卫星细胞,SV40-LT,细胞系,PAX7

基金：国家自然科学基金面上项目(32372873);中原青年拔尖人才(ZYYCYU202012156);河南省高校科技创新人才支持计划(22HASTIT038)

旨在通过慢病毒包装SV40-LT基因并转导PMSCs以构建鸡骨骼肌卫星细胞系。本研究采集20~30枚15胚龄健康AA鸡的胸部组织,采用混合酶消化法分离培养PMSCs。将细胞随机分为两组,每组3个重复,处理组选择SV40-LT慢病毒转染48 h后,更换含1 μg·mL-1的嘌呤霉素筛选培养基于处理组和对照组(病毒不转染)。待对照组细胞全部死亡,对处理组细胞进行不断传代培养,最终获得鸡骨骼肌卫星细胞系。免疫荧光试验分析鸡骨骼肌卫星细胞标志基因PAX7的表达;采用CCK-8和细胞周期分析检测细胞增殖特性;血清依赖性和软琼脂分析检测其恶性转化情况;构建诱导分化模型检测其诱导分化能力。结果表明,PMSCs中有92%细胞PAX7基因呈阳性,可用于后续研究。SV40-LT基因在鸡骨骼肌卫星细胞系(IMSCs P12)中的表达是原代鸡骨骼肌卫星细胞的15倍,且连续传代至12代后,IMSCs P12与PMSCs均呈纤维样状。IMSCs P12具有更高的增殖活性且没有发生恶性转化,随后,对IMSCs P12进行诱导分化,在其增殖至70%到诱导分化1 d这一阶段,IMSCs P12与PMSCs的PAX7基因表达下调,而MyoD和MyHC基因表达上调。结果提示,本研究通过转染SV40-LT基因成功培养了鸡骨骼肌卫星细胞系,其具有与原代鸡骨骼肌卫星细胞相似的特性。该细胞系的建立为研究家禽骨骼肌相关的功能基因提供了新的平台,也为SV40-LT基因在家禽细胞永生化的研究奠定了基础。

来源：2023年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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