畜牧兽医学报

作者：薛鸿雁, 杨孟雨, 杨欢, 董丽君, 蔡霞清, 赵泽民, 王鲜忠

单位：西南大学动物医学院, 重庆 400715

关键词：热应激,睾丸支持细胞,JNK,细胞凋亡,ALOX15B

基金：国家自然科学基金(32072940)

旨在研究花生四烯酸脂氧合酶15B(arachidonate lipoxygenase type B, ALOX15B)是否参与了热应激条件下丙二醛(malondialdehyde, MDA)与活性氧(reactive oxygen species, ROS)的生成,进而调控睾丸支持细胞凋亡,以及JNK信号通路(jun amino terminal kinase, JNK)是否在这一过程中发挥了作用。本研究从20只3周龄的三元杂交仔猪的睾丸组织中分离出支持细胞,随机分为3组,每组3个重复,将体外培养的仔猪睾丸支持细胞在44℃条件下处理30 min作为热应激模型,分别转染ALOX15B的siRNA、添加ALOX15B抑制剂(黄芩素)或JNK抑制剂后,运用流式细胞术检测细胞的凋亡率,使用Western blotting检测磷酸化JNK、ALOX15B和p53的蛋白表达,利用ELISA检测8-HETE与15-HETE的含量,采用试剂盒检测MDA和ROS的水平。结果显示,与单独的热应激组相比,黄芩素和热应激联合处理减少了8-HETE和15-HETE的含量(P<0.01),降低了MDA和ROS的水平(P<0.01),抑制了热应激诱导的细胞凋亡率(P<0.01);在热应激条件下,黄芩素和ALOX15B的siRNA均抑制了热应激诱导的JNK的磷酸化(P<0.01);JNK抑制剂SP600125可抑制热应激条件下p53的表达水平(P<0.01),降低细胞凋亡率(P<0.01)。与单独的热应激组相比,SP600125和热应激联合处理反馈抑制了ALOX15B的表达(P<0.01),减少了脂质过氧化物8-HETE(P<0.01)与15-HETE的含量(P<0.05),降低了MDA和ROS的水平(P<0.01)。这表明,在热应激条件下,ALOX15B使MDA和ROS的水平升高,诱导了支持细胞凋亡,JNK通过激活p53参与了ALOX15B调节的支持细胞凋亡;JNK可反馈调节ALOX15B、8-HETE、15-HETE、MDA和ROS的水平。

来源：2023年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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