畜牧兽医学报

作者：宋鹏琰, 王思伟, 岳巧娴, 张寅梁, 陈晓勇, 周荣艳

单位：1. 河北农业大学动物科技学院, 保定 071001;2. 河北省农林科学院粮油作物研究所, 石家庄 050035

关键词：绵羊,miR-200b,启动子,卵泡颗粒细胞,线粒体

基金：河北农业大学精准畜牧学科群建设项目(1090064);河北省科学自然科学基金项目(C2019204039)

旨在鉴定绵羊miR-200b的启动子区并研究其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响。本研究体外分离培养绵羊卵泡颗粒细胞,通过构建包含3个不同长度启动子区重组质粒,利用生物信息软件和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-200b核心启动子区;利用在线工具预测转录因子NR4A1的结合位点;通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR检测过表达NR4A1基因对miR-200b启动子活性和表达水平的影响;通过转染miR-200b mimic和mimic NC,分别检测颗粒细胞线粒体形态和数量、线粒体膜电位、ROS水平、ATP和线粒体呼吸链复合物 Ⅰ 的浓度,并检测线粒体氧化磷酸化相关基因表达水平。结果表明,miR-200b-P1(-159/+36 nt)活性最高,确定该区域为miR-200b核心启动子区;预测出核心启动子存在1个NR4A1的结合位点,且过表达NR4A1基因显著上调miR-200b启动子活性和miR-200b的表达水平(P<0.01)。与mimic NC组相比,转染miR-200b mimic导致颗粒细胞平均光密度显著降低(P<0.01),细胞长度显著缩短(P<0.01)、线粒体膜电位下降(P<0.05)、ATP(P<0.05)和线粒体呼吸链体复合物 Ⅰ (P<0.01)的浓度降低、ROS水平升高(P<0.01),同时下调ATP6V1G1和NDUFV1的表达(P<0.01),上调NOX4的表达水平(P<0.01)。该研究确定了绵羊miR-200b的核心启动子区(-159/+36 nt),NR4A1正向调控miR-200b的转录,且miR-200b能够影响线粒体氧化磷酸化过程,诱导颗粒细胞线粒体损伤。该研究结果为进一步揭示miR-200b调控绵羊卵泡发育的机制提供了理论依据。

来源：2023年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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