畜牧兽医学报

作者：范锦全, 张宇航, 唐午阳, 赵欣宇, 李丕顺, 郑晓峰

单位：湖南农业大学动物医学院, 长沙 410125

关键词：地西他滨,猪圆环病毒,抗病毒,固有免疫

基金：湖南省科技厅项目(2019RS1050;2021JJ30354)

猪圆环病毒2型(PCV2)作为无囊膜单股负链环状DNA病毒,能引起感染猪的免疫抑制,是猪圆环病毒相关疾病的主要病原体,广泛传播于世界各地,给全球养猪业造成了巨大损失。为探究地西他滨(DAC)对PCV2增殖的影响及其作用机制。本研究构建了感染PCV2的PK-15细胞模型,使用CCK-8法检测DAC对PK-15细胞的细胞毒性,进而使用荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western blot检测DAC对PCV2增殖水平的影响;通过间接免疫荧光法标记5甲基胞嘧啶表征DAC对细胞基因组DNA全局甲基化的影响;通过RNA干扰技术在PK-15细胞中沉默DAC的作用靶点DNA甲基转移酶1(Dnmt1),进一步探究DAC抑制PCV2增殖的作用机理。结果显示,DAC在20 μmol·L-1时才具有轻微的细胞毒性,并在浓度为10 μmol·L-1时即表现出明显的抗PCV2活性,可以抑制不同时间的PCV2增殖。DAC处理细胞后能显著降低PK-15细胞基因组DNA的甲基化,并诱导Ⅰ型干扰素(Ⅰ-IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达。沉默DAC的作用靶点Dnmt1能显著抑制PCV2的增殖,且同样诱导I-IFN和ISGs的表达。本研究证实DAC能够有效抑制PCV2的增殖,且发现DAC能促进I-IFN和ISGs的表达并抑制DNA的甲基化,推测DAC抗PCV2病毒的功能与I-IFN和ISGs的表达上调有关,提示DAC具备开发成PCV2临床抗病毒药物的潜力,还揭示Dnmt1是激活宿主固有免疫抗病毒通路的潜在靶点,为新的PCV2抗病毒药物研发提供理论依据。

来源：2023年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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