畜牧兽医学报

作者：张家祺, 贾浠宁, 周群, 宋鑫, 朱晨曦, 李格格, 张斌

单位：1. 西南民族大学畜牧兽医学院, 成都 610041;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室, 成都 610041

关键词：牛病毒性腹泻病毒,E2蛋白,杆状病毒,病毒样颗粒,免疫原性

基金：“十四五”国家重点研发计划课题(2021YFD1600203);国家农业产业技术体系四川肉牛创新团队专项(SCCXTD-2020-13);西南民族大学2023年中央高校优秀学生培养工程项目(2023NYXXS110)

本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1) E2 病毒样颗粒(VLPs),并测定其对小鼠的免疫效力。选用BVDV-1 SWU-Z6株的E2基因序列为模板,针对昆虫细胞密码子偏嗜性优化合成E2基因,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备BVDV-1 E2 VLPs。采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证E2蛋白在SF9细胞中的表达,通过电镜鉴定BVDV-1 E2 VLPs的组装。对获得的VLPs进行超离纯化,使用不同剂量的VLPs添加MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂肌注免疫小鼠,同时设立BVDV商业灭活苗组和PBS空白对照组。二免4周后选用BVDV-1 SWU-Z6毒株以灌胃途径对小鼠进行攻毒,通过小鼠体重变化以及粪便中的病毒载量来评估BVDV-1 E2 VLPs的免疫保护效果。经酶切鉴定和测序验证表明,优化后的E2基因已正确克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Dual中,并获得重组质粒pFast Dual BVDV-1 E2,将重组质粒转化到DH10.Bac感受态细胞经过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-BVDV-1 E2,将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BVDV-1 E2。电镜下观察可见大量直径在80~100 nm的BVDV病毒样颗粒,IFA和Western blot结果证实重组杆状病毒能够正确表达E2蛋白,并具有良好的生物学活性。BVDV-1 E2 VLPs 50 μg组小鼠首免2周时ELSIA抗体效价约为1∶10 000,加强免疫2周后抗体效价达到1∶100 000。攻毒保护试验结果表明,免疫组小鼠在攻毒后第7天表现出体重下降,而后开始回升;在攻毒后第10天采集粪便没有检测到病毒拷贝。与非免疫组小鼠相对比,BVDV-1 E2 VLPs 50 μg剂量两次免疫后阻止了因病毒感染而导致体重下降以及消化道内病毒的复制。研究中成功制备了BVDV-1 E2 VLPs,能诱导机体产生较强的体液免疫反应,可使小鼠获得抵抗BVDV-1 SWU-Z6毒株感染的免疫保护力。

来源：2023年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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