畜牧兽医学报

作者：李林燕, 滕蔓, 刘金玲, 郑鹿平, 柴书军, 丁轲, 余祖华, 罗俊

单位：1. 河南科技大学动物科技学院, 功能微生物与畜禽健康实验室, 洛阳 471003;2. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室, 农业农村部动物免疫学重点实验室, 河南省动物免疫学重点实验室, 郑州 450002;3. 河南省农业科学院, 中英禽病国际研究中心, 郑州 450002

关键词：马立克病,单克隆抗体,糖蛋白gB,间接免疫荧光试验,共聚焦分析,蛋白质免疫印迹

基金：国家重点研发计划(2023YFE0106100);国家自然科学基金(U21A20260);河南省杰出青年科学基金(232300421009);河南省农业科学院自主创新项目(2023ZC089)

马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的危害最严重的一种家禽免疫抑制病与肿瘤病,制备MDV单克隆抗体可为后续的基因功能、致病机制及诊断技术研究提供关键试剂。本研究利用NE-PERTM细胞核和细胞质提取试剂,分别制备了vvMDV(MDV超强毒株)标准毒株Md5感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)核蛋白和浆蛋白,通过切向流超滤浓缩后制备免疫原,分别免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,常规细胞融合方法制备单克隆抗体杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光试验(IFA)筛选,建立了一个容量为 31株纯化的MDV单克隆抗体杂交瘤细胞库,包括27株稳定分泌MDV-1特异性抗体和4株稳定分泌MDV-1、MDV-2和火鸡疱疹病毒(HVT)保守抗体的杂交瘤细胞株。经过293T细胞真核表达gB蛋白并结合IFA染色,其中1株单克隆抗体J-1F3-C6被鉴定为MDV糖蛋白gB的特异性单克隆抗体,其单抗腹水IFA效价为1∶25 600,轻链型为Kappa,IgG亚型为IgG2a。进一步IFA染色表明,J-1F3-C6可特异性识别MDV-1、MDV-2和HVT毒株表达的gB蛋白,但在蛋白质免疫印迹(Western blot)分析中J-1F3-C6只与MDV-1和HVT发生特异性反应。综上,本研究建立了一个MDV单克隆抗体杂交瘤细胞库,并从中筛选鉴定了1株gB蛋白特异性的单克隆抗体,为后续研究奠定了重要基础。

来源：2023年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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