畜牧兽医学报

作者：郭心雨, 王昊天, 张雪梅, 王小龙, 李和平, 杨彦宾, 钟凯

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 农业农村部动物生物与营养重点实验室, 郑州 450046;2. 河南省银丰生物工程技术有限公司, 郑州 450000

关键词：奶牛乳腺炎,外泌体,巨噬细胞极化,脂多糖

基金：河南农业大学校企横向科技项目(YF5W23-2021-BOT-096)

本研究旨在探究不同牛乳来源外泌体(exosomes, Exo)对巨噬细胞极化的影响。无菌采集10份牛乳样品,通过体细胞数(somatic cell count, SCC)测定和细菌学鉴定判断乳样性质;差速超速离心法富集纯化牛乳来源Exo;通过纳米颗粒跟踪分析(NTA)、透射电镜(TEM)、Western blot(WB)鉴定Exo;荧光示踪法检测Exo能否被巨噬细胞(Raw264.7)内化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛乳来源Exo作用于Raw264.7细胞后促炎性细胞因子、抗炎性细胞因子mRNA水平及蛋白水平的变化。通过SCC判定有4份正常乳样,6份炎症乳样;从炎症乳样中分离出4株致病菌,生物学特性分别与大肠杆菌、绿脓杆菌和克雷伯肺炎杆菌基本一致,经16S rDNA基因测序比对分析证实菌株为上述致病菌;超速离心法分离得到10份乳样Exo;不同牛乳样本来源Exo与Raw264.7共培养6 h后均能被其内化;与对照(Con)组相比,低体细胞数来源Exo(L-Exo)组和高体细胞数来源Exo(H-Exo)组均能显著增加Raw264.7细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),一氧化氮合酶(iNOS)和巨噬细胞甘露糖受体CD206蛋白表达显著升高(P<0.05),IL-10、转化生长因子(TGF)-β的mRNA和蛋白水平下降(P<0.05),精氨酸酶(Arg)-1 mRNA表达水平下降(P<0.05)。在奶牛乳腺炎症反应过程中,炎症奶牛牛乳来源Exo可促进巨噬细胞向M1型极化,高表达促炎性细胞因子,促进炎症反应,而乳腺健康状态下分泌的Exo能介导巨噬细胞向M2型极化,表达高水平的抗炎性细胞因子,参与机体免疫调节,有一定的抗炎作用,证明牛乳Exo可调节巨噬细胞极化过程。

来源：2023年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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