畜牧兽医学报

作者：张力, 许加龙, 黄锦钰, 许子月, 雷昕诺, 卢会鹏, 朱睿, 孙伟翔, 曹海月, 王安平, 朱善元

单位：1. 江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室 江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心, 泰州 225300;2. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300;3. 南京大学医学院, 南京 210093

关键词：鹅,骨骼肌卫星细胞,分离,培养,鉴定

基金：江苏省种业振兴揭榜挂帅项目（JBGS〔2021〕030）；江苏省高等学校基础科学（自然科学）研究项目资助（23KJB230002）；江苏省高职院校青年教师企业实践培训项目资助；江苏农牧科技职业学院自然科学基金储备项目（NSF2022CB06）；江苏农牧科技职业学院科技创新团队项目（NSF2023TC02）

旨在建立鹅骨骼肌卫星细胞体外分离、培养、纯化及鉴定的方法。本研究选取健康10周龄溆浦鹅仔鹅为试验材料，采用分散酶Dispase II和胶原酶II共同作用肌肉组织分离得到卫星细胞，利用差速贴壁法纯化卫星细胞，在体外培养过程中，含有20% FBS并添加bFGF的DMEM/F12生长完全培养基能较好维持卫星细胞的分化潜能，培养过程中涉及的培养皿需经基质胶特别包被处理；诱导分化出成熟肌管后，采用免疫荧光法和Western blotting检测肌球蛋白重链MyHC的表达，采用qRT-PCR检测Pax7、MyoD1、MyoG基因在诱导分化前（growth medium，GM）和分化后（differentiation medium，DM）的相对表达量，分化前后每组均3个重复。结果表明，新分离得到的卫星细胞体积较小，折光性强，贴壁后呈中间彭起两端针状的梭形结构，经免疫荧光鉴定呈Pax7阳性；诱导分化后可形成成熟多核肌管，免疫荧光检测成肌特异性标志MyHC呈阳性，统计分化指数高达78%（P<0.01）；qRT-PCR检测标志性基因Pax7、MyoD1、MyoG呈阳性，并且分化前Pax7基因相对表达量是分化后的2.22倍（P<0.01），而分化后标志性基因MyoD1、MyoG的相对表达量分别是分化前的1.90（P<0.01）和44.22倍（P<0.01）；Western blotting结果显示分化后MyHC蛋白表达水平明显升高。综上所述，本研究建立了一种基于胶原酶Ⅱ和分散酶Dispase II的混合酶分离鹅骨骼肌卫星细胞的方法，提供的培养体系能够使细胞在体外培养过程中维持巨大的分化潜能，为鹅肌肉组织生长发育分子调控机制的研究提供了良好的细胞模型。

来源：2023年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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