畜牧兽医学报

作者：张硕, 周雨潇, 吴海波, 索伦

单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院, 上海 200011

关键词：CRISPR/Cas9,基因编辑,动物育种

基金：中国博士后科学基因资助项目（2022M722133）；国家重点研发项目（2018YFC1003004）

旨在通过构建体外细胞模型研究在长效CRISPR系统作用下基因编辑的动态结局，为在体生殖系长效编辑提供研究支持。本研究以FANCF和VEGFA基因为例，通过慢病毒随机整合的方式构建了一套长效表达CRISPR/Cas9的细胞模型，并以该模型为对象研究长效CRISPR系统作用下，基因编辑效率和修复的动态结局。在FANCF和VEGFA基因外源靶点区域，随着Doxycycline诱导时间的增加，CRISPR/Cas9的编辑效率逐渐升高，并分别于第4天（FANCF）、第3天（VEGFA）编辑效率达到峰值；其次，对应上述靶区的内源靶点的达到峰值的时间点与外源靶点基本一致，但内源靶点的编辑效率显著高于外源靶点（P<0.000 1）；再次，对靶点编辑产物序列分析发现，在编辑的第4~7天，各靶点编辑产物的删除、插入及其它类型呈稳定状态，内、外源各位点编辑结局中删除、插入以及其它类型的占比趋势一致；最后，对FANCF靶点潜在的6个脱靶位点进行检测，均未发现任何脱靶现象。长效CRISPR/Cas9技术的编辑效率在第3或第4天达到峰值，各基因编辑结局类型占比趋势一致，且在FANCF位点上不会增加脱靶风险。

来源：2023年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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