畜牧兽医学报

作者：张芳源, 杨大为, 仇德洋, 姜国骞, 李桂梅, 单虎

单位：1. 青岛农业大学动物医学院, 青岛 266109;2. 山东省新兽药创制协同创新中心, 青岛 266109;3. 山东省兽药诊断试剂工程技术研究中心, 青岛 266109

关键词：非洲猪瘟病毒,P30蛋白,原核表达,液相芯片技术,抗体检测

基金：山东省重点研发计划（2020CXGC010801-02）；山东省农业重大应用技术创新项目（SD2019XM003）

本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）的抗体液相芯片检测方法。首先构建pET-28a-p30表达载体，利用大肠杆菌（Escherichia coli）原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白，然后将重组P30蛋白与羧基化的荧光微球偶联，建立ASFV P30抗体液相芯片检测方法。经鉴定，重组质粒成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞，并以包涵体形式表达，Western blot结果显示重组P30蛋白可以与ASFV阳性血清产生特异性反应，证明其具有良好的反应原性。建立的ASFV抗体液相芯片检测方法检测中值荧光强度（median fluorescent intensity，MFI）阈值为1 575.7，最佳结合蛋白浓度为每1.25×106个微球6 μg，最佳血清稀释度为1：600，最佳二抗浓度为1 μg·mL-1，该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。用建立的方法和商品化ELISA试剂盒同时对92份临床采集的猪血清样本进行检测，结果显示二者符合率为92.39%。本研究成功表达重组P30蛋白，并建立了ASFV P30抗体液相芯片检测方法，为ASFV感染早期的血清学检测提供了新的方法，也为多种病原体的抗体检测奠定了基础。

来源：2023年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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