畜牧兽医学报

作者：何辰香, 高闪电, 田占成, 独军政, 王锦明, 关贵全, 殷宏

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730046;2. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：牛流行热,牛流行热病毒,牛流行热灭活疫苗,GNS蛋白,鉴别诊断ELISA

基金：甘肃省重点研发计划（22YF7NA030）；甘肃省创新引导计划-科技特派团专项（22CX8NA011）；兰州市科技计划项目（2021-1-12）；国家重点研发计划项目（2021YFD1800500）；甘肃省基础研究创新群体项目（22JR5RA024）；国家肉牛牦牛产业技术体系（NBCIS，CARS-37）；农业科技创新工程（CAAS-ASTIP-2016-LVRI）。

旨在建立牛流行热病毒（BEFV）感染与疫苗免疫的抗体ELISA诊断方法。在证实BEFV GNS截短体与BEFV感染血清特异性反应的基础上，利用原核表达系统表达纯化GNS全长蛋白并以其作为包被抗原，优化反应条件，建立基于BEFV GNS的鉴别病毒感染与疫苗免疫的BEFV间接ELISA方法。结果显示：在大肠杆菌中成功表达GNS蛋白，主要以包涵体的形式存在，纯化获得73 ku的重组蛋白。Western blot结果显示，纯化后的重组蛋白与BEFV感染牛血清反应原性良好，且与BEF疫苗免疫牛血清未见反应。GNS抗原最佳包被浓度为0.50 μg·mL-1，血清最佳稀释度为1：20，酶标二抗最佳稀释度为1：4 000，阴阳性临界值为S/P值0.206 9。该方法与BVDV、FMDV以及IBRV阳性血清无交叉反应，特异性良好；批内和批间变异系数均小于10%，重复性良好，可用于BEFV感染与疫苗免疫牛的鉴别诊断。

来源：2023年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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