畜牧兽医学报

作者：郑若愚, 肖洁, 白鑫, 陈浩, 蒲家艳, 任永军, 杨光友

单位：1. 四川农业大学动物医学院, 成都 611130;2. 四川省畜牧科学研究院, 成都 610066;3. 动物遗传育种四川省重点实验室, 成都 610066

关键词：兔,大型艾美耳球虫,三磷酸甘油醛脱氢酶,重组蛋白,免疫保护

基金：四川省科技计划项目（2022ZHYZ0003）；国家重点研发计划（2017YFD0501200）

本研究旨在评价大型艾美耳球虫重组蛋白（rEm-GAPDH）对兔的免疫保护效果，为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。根据转录组数据筛选出Em-GAPDH基因，进行原核表达与蛋白纯化；将50只45日龄无球虫感染幼兔随机分为5组（空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEm-GAPDH免疫组），分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100 μg pET-32a空载蛋白和1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1mL 100 μg rEm-GAPDH含1 mg Quil-A，首免14 d后同等剂量加强免疫，二免14 d后每只兔经口感染1×105个大型艾美耳球虫孢子化卵囊，观察各组兔临床症状，每周固定时间采血和称重，感染14 d后宰杀剖检并测定和统计各组兔的卵囊排出量、相对增重、特异性IgG抗体和细胞因子等。结果成功表达了重组蛋白rEm-GAPDH，大小在59 ku左右，且大部分表达在包涵体。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现症状，而免疫组症状不明显。rEm-GAPDH免疫组的卵囊减少率达57.16%，相对增重率显著大于不免疫攻虫组（P<0.05），ACI值为144.96。特异性IgG抗体水平、细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β）水平均与对照组存在显著差异（P<0.05）。大型艾美耳球虫重组蛋白rEm-GAPDH可以减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可以作为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。

来源：2023年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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