畜牧兽医学报

作者：刘华, 殷冬冬, 邵颖, 宋祥军, 王振宇, 潘孝成, 涂健, 何长生, 朱良强, 祁克宗

单位：1. 安徽农业大学, 合肥 230036;2. 安徽省动物疫病预防与控制中心, 合肥 230091;3. 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所, 合肥 230031

关键词：猪流行性腹泻病毒,CRISPR/Cas13a,重组酶辅助扩增,N基因,检测

基金：国家自然科学基金面上项目(31972642);安徽省高校协同创新项目(GXXT-2019-035)

将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关 Cas13a 蛋白(CRISPR-Cas13a)技术相结合,即RAA-Cas13a,建议建立高效、灵敏、特异的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法。针对PEDV N基因保守区设计RAA 特异性引物和 CRISPR RNA(crRNA),利用 RAA 技术扩增样本核酸,并进行 CRISPR-Cas13a荧光检测,以RT-qPCR为对照方法,评价该方法的灵敏度、特异性及与RT-qPCR法的一致性。结果表明,该方法最低可检测至101 copies·μL-1,且与猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪伪狂犬病病毒等常见猪源病原核酸检测无交叉反应。采用RAA-Cas13a检测40份临床样本与RT-qPCR方法阳性符合率为100%,阴性符合率为84.6%,总符合率为95%,Kappa值为0.881。本研究建立的RAA-Cas13a方法灵敏度高、特异性强,为PEDV的临床诊断和流行病学监测提供了可靠的技术手段。

来源：2023年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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