畜牧兽医学报

作者：贺名扬, 马钰静, 王泳, 杨若晨, 刘月琴, 张英杰, 段春辉

单位：河北农业大学动物科技学院, 保定 071000

关键词：褪黑素,绵羊,颗粒细胞,增殖,类固醇激素

基金：河北省重点研发计划资助项目（19227041D）；国家肉羊产业技术体系资助项目（CARS-38）

旨在研究褪黑素（melatonin，MT）对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌及相关基因表达的影响，以期解析MT影响绵羊繁殖的路径。本研究采集1岁龄体重相近饲养条件相同的20只健康小尾寒羊母羊新鲜卵巢，收集2~3 mm卵泡的颗粒细胞，随机分为5组，每组5个重复，分别添加0、10-9、10-8、10-7、10-6 mol·L-1MT，培养48 h后CCK8和Annexin V-FITC分别检测颗粒细胞的增殖和凋亡，确定体外培养浓度为10-7 mol·L-1，将细胞随机分为2组，每组3个重复，收集试验组（添加10-7 mol·L-1）和对照组（不添加）培养液及裂解液上清，ELISA检测孕酮（P4）、雌二醇（E2）和cAMP的含量，并利用RT-qPCR和Western blot分析MT对绵羊颗粒细胞MT受体基因、凋亡相关基因和类固醇分泌相关基因mRNA和蛋白表达的影响。结果表明，添加MT各试验组均显著提高了颗粒细胞增殖活力，其中10-7、10-6和10-8 mol·L-1组颗粒细胞增殖活力显著高于10-9 mol·L-1组（P0.05）。添加10-7、10-6和10-8 mol·L-1 MT颗粒细胞早期凋亡和晚期凋亡率极显著低于10-9 mol·L-1组和对照组（P0.05），而10-9 mol·L-1组对细胞凋亡没有显著影响（P>0.05）。添加10-7 mol·L-1 MT颗粒细胞P4分泌显著降低（P0.05）。添加10-7 mol·L-1 MT可显著上调MT受体基因MT1的mRNA和蛋白表达水平及抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达（P0.05）。综上，绵羊卵巢颗粒细胞体外培养添加MT通过上调抗凋亡基因表达，下调凋亡基因表达，抑制绵羊卵巢颗粒细胞凋亡；MT与MT1受体结合通过下调FSHR、StAR、CYP11A1和3β-HSD表达，抑制了P4的分泌。

来源：2023年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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