畜牧兽医学报

作者：李悦欣, 刘爱菊, 马晓菲, 郑忠, 胡伯欣, 智云霞, 田树军

单位：1. 河北农业大学动物科技学院, 保定 071000;2. 沧州职业技术学院农牧工程系, 沧州 061000

关键词：TGFβR1,绵羊,颗粒细胞,TGF-β/Smad信号通路

基金：河北农业产业技术体系（HBCT2023200203）；河北省重点研发计划（20326349D）

旨在探究TGFβR1介导TGF-β/Smad信号通路调控绵羊颗粒细胞功能的机制。本试验收集绵羊卵巢颗粒细胞，通过构建pcDNA3.1（+）-TGFβR1和pcDNA3.1（+）-SMAD4过表达质粒载体及shRNA-TGFβR1和shRNA-SMAD4干扰表达质粒载体，对绵羊颗粒细胞中TGFβR1和SMAD4基因分别进行过表达和干扰，利用CCK-8细胞增殖检测、流式细胞术、Annexin-V FITC/PI双染技术检测绵羊颗粒细胞增殖、细胞周期及凋亡功能，并结合Real-Time PCR及Western blot检测TGFβR1、SMAD4的mRNA水平和细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL2、Caspase3的表达水平及TGF-β/Smad信号通路中TGFβR1、TGFβR2、SMAD2/3的磷酸化水平。结果显示，过表达TGFβR1和SMAD4均极显著促进颗粒细胞从G0/G1期进入S期的能力（P<0.01）、颗粒细胞增殖及抗凋亡蛋白BCL2的表达（P<0.01），抑制凋亡蛋白BAX和Caspase3表达（P<0.01）。干扰TGFβR1和SMAD4均极显著促进颗粒细胞凋亡及凋亡蛋白BAX和Caspase3的表达（P<0.01），抑制抗凋亡蛋白BCL2的表达（P<0.01）。进一步研究发现，过表达TGFβR1可促进TGF-β/Smad信号通路中TGFβR1、TGFβR2及SMAD2/3磷酸化水平（P<0.01），并极显著促进SMAD4的蛋白表达水平（P<0.01）；干扰TGFβR1则显著抑制TGFβR1、TGFβR2（P<0.01）及SMAD2/3的磷酸化水平（P<0.05），并抑制SMAD4的蛋白表达（P<0.01）；过表达SMAD4则会显著促进TGFβR1蛋白的表达（P<0.01）。研究表明，TGFβR1促进绵羊颗粒细胞的增殖及周期进程，抑制颗粒细胞凋亡，通过介导TGF-β/Smad信号通路中SMAD2/3及SMAD4的表达正向调控绵羊颗粒细胞的增殖与周期，并负向调控其凋亡。

来源：2023年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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