畜牧兽医学报

作者：王婉洁, 陈南珠, 邹惠影, 周心仪, 郝海生, 庞云渭, 朱化彬, 赵学明, 余大为, 杜卫华

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

关键词：ASH1L甲基转移酶,牛卵丘细胞,过表达,细胞增殖,细胞凋亡,H3K36me1/2

基金：中国农业科学院科技创新工程项目（ASTIP-IAS06）；西藏重点研发项目（XZ202301ZY0003N030）；现代农业产业技术体系（CARS-36）

旨在探究缺失的、小的、同源异形1（absent，small，or homeotic 1-like，ASH1L）过表达对牛卵丘细胞（cumulus cells，CCs）增殖和凋亡的影响。本研究将牛ASH1L SET结构域的cDNA序列克隆到pcDNA3.1上，构建牛ASH1L过表达载体；以导入pcDNA3.1+ASH1L载体的牛CCs为过表达组（ASH1L-OE），野生型牛CCs为对照组（Control），采用免疫荧光染色检测两组细胞中ASH1L表达水平和H3K36me1/2/3甲基化水平；通过流式细胞术分析ASH1L过表达细胞的凋亡和增殖情况；采用荧光定量PCR检测两组细胞中凋亡、增殖相关基因的mRNA表达水平。以牛CCs cDNA为模板，PCR扩增获得长2 487 bp的牛ASH1L SET结构域DNA片段，与pcDNA3.1载体连接；经Nhe I/Not I双酶切和测序鉴定，成功构建过表达载体pcDNA3.1+ASH1L。过表达载体转染牛CCs后，细胞中ASH1L mRNA及其蛋白表达水平、H3K36me1/2甲基化水平均显著升高（P<0.05）。另外，ASH1L过表达显著提高了活细胞率（91.85±1.25）%vs.（87.39±1.71）%，降低了细胞凋亡率（8.08±1.21）%vs.（12.51±1.72）%，并显著下调了凋亡基因BAX和CASPASE-3 mRNA表达水平（P<0.05），上调抗凋亡基因BCL-2 mRNA表达水平（P<0.01）。ASH1L过表达24、36 h时，细胞增殖率、增殖相关基因PCNA、CCND2表达水平显著升高（P<0.05）。可见，ASH1L过表达抑制了牛CCs凋亡，诱导了细胞增殖及H3K36me1/2甲基化水平的升高，为进一步研究ASH1L对CCs生长和卵泡发育的调控提供技术和理论基础。

来源：2023年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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