畜牧兽医学报

作者：刘桃雪, 苏冰倩, 齐艳丽, 郭江涛, 刘忠虎, 褚贝贝, 王江, 曾磊

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046;2. 河南农业大学, 农业农村部动物生化与营养重点实验室, 郑州 450046;3. 河南农业大学, 河南省动物生长发育调控重点实验室, 郑州 450046

关键词：非洲猪瘟病毒,p30蛋白,原核表达,单克隆抗体,抗原表位

基金：河南农业大学青年英才项目；河南省教学改革项目（2021SJGLX351）

为制备非洲猪瘟病毒（ASFV） p30蛋白的单克隆抗体，以原核表达的重组p30蛋白为免疫原免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠，3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合，通过间接ELISA方法筛选。结果获得2株能稳定分泌抗ASFV p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2G10-2和6D2-1。抗体效价分别为1：12 800和1：3 200。亚型鉴定结果显示，2株单克隆抗体的重链均属于IgG，轻链均为κ型。Western blot和间接免疫荧光试验结果显示，2株单克隆抗体与p30蛋白均具有良好的结合活性。通过Western blot检测，2株单克隆抗体能有效结合截短重组p30蛋白的170~194位氨基酸，证明其抗原识别区域为第170~194位氨基酸。本研究制备了p30蛋白的2株单克隆抗体，并对其抗原表位进行鉴定，为ASFV p30蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。

来源：2023年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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