畜牧兽医学报

作者：王煜, 高月异, 高金源, 刘伟洁, 徐慧琳, 薛青红

单位：1. 中国兽医药品监察所, 北京 100089;2. 青岛易邦生物工程有限公司, 青岛 266041

关键词：小反刍兽疫病毒,反向遗传,病毒拯救

基金：国家重点研发计划（2021YFD1800503）；中国兽医药品监察所兽药行业公益性重点专项（P2021012020）

小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）是影响全球畜牧业的一种重要病原。本研究旨在建立稳定可靠的PPRV反向遗传操作平台，为解析PPRV致病机理、免疫逃逸机制、病毒复制机制等基础理论研究提供有效的技术平台，同时为开发更加安全、有效的新型疫苗奠定必要的前期基础。通过提取PPRV Clone9株的RNA，采用RT-PCR分6段扩增出PPRV反基因组cDNA，通过酶切、连接出PPRV Clone9株全长反基因组，获得pB-PPRV，同时构建表达PPRV核蛋白（nucleoprotein，N）、磷蛋白（phosphoprotein，P）和大蛋白（large protein，L）的3个辅助质粒。将pB-PPRV与辅助质粒通过脂质体转染BHK-T7细胞。转染3 d后，冻融3次，感染Vero细胞。传至第二代可观察到明显的细胞病变（CPE）。经间接免疫荧光、Western blot、RT-PCR和序列测定鉴定结果表明，拯救出具有感染性的病毒。拯救病毒（rPPRV-Clone9）在Vero细胞上可稳定传代，增殖动态与亲本病毒相似。本研究成功建立了PPRV Clone9株的反向遗传系统。

来源：2023年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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